含硒型牛副伤寒活疫苗对牦牛免疫效果的观察

2020-01-18 10:05 来源:未知

  硒是牛体不可缺少的微量元素之一。据调查我国约有23的地区缺硒。据李文盛等研究表明,甘肃省甘南州、张掖市、肃南等牦牛主要繁殖生产区为硒的严重患病区,土壤水溶性硒在0.010 μg/g左右,饲草饲料硒在0.031 μgg以下,畜禽血硒在0.075 μgml?以下;同时牛副伤寒也是该地区牦牛的高发病,每年的发病率平均约在30%以上。缺硒可影响牛体的正常发育、繁殖、免疫抵抗力,严重时可导致疾病的发生,甚至引起死亡。而通常采取的预防缺硒措施是在精粮或饮水中添加一定量的亚硒酸钠,可起到良好的预防效果,但在牦牛主产区以自由放牧为主,日粮添加亚硒酸钠拌不均或饮水剂量难以掌握,且亚硒酸钠补硒后血硒浓度在临界水平以上的持续时间短等原因,难以在牦牛饲养管理上应用。 基于上述原因,又根据难溶于水的亚硒酸钡补硒可使机体血硒浓度在临界水平以上维持时间长,并结合牛副伤寒病是牦牛的高发病。因此,有必要研制一种既可预防牛副伤寒又可补硒或预防缺硒的一种新型的疫苗—含硒型牛副伤寒活疫苗。通过检查其安全性、免疫效果及对机体的影响,以探索牦牛的补硒和牛副伤寒的预防“合二为一”的可行性。? 1 材料与方法 1.1 亚硒酸钡安全剂量试验? 1.1.1 含亚硒酸钡注射液的制备 称取一定剂量的铝胶,不同量的亚硒酸钡,双蒸水等制成含硒浓度不同的混悬液,高压灭菌。? 1.1.2 含亚硒酸钡注射液组 将含5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、30 mg、60 mg硒的注射液,经颈部或臀部肌肉注射,年龄不等的(4月龄以下)牦犊牛随机抽样,每一剂量注射10头,观察中毒情况。 1.1.3 含硒型牛副伤寒活疫苗组 将含硒型牛副伤寒活疫苗分别以se 5 mg 15亿活菌、se 10 mg 15亿活菌、se 15 mg 15亿活菌、se 20 mg 15亿活菌、se 30 mg 15亿活菌、se 60 mg 15亿活菌的剂量经颈部或臀部肌肉注射年龄不等的(4月龄以下)牦犊牛,随机抽样,每一种剂量免疫接种10头, 观察中毒情况。? 1.2 含硒型牛副伤寒活疫苗与牛副伤寒活疫苗的对比试验? 1.2.1 试验牛及分组 4月龄以下且经检查为都柏林沙门氏菌阴性的牦犊牛,随机分成2组,每组20头,试验组配戴牛耳号。? 1.2.2 含硒型牛副伤寒活疫苗 疫苗由本课题组研制,批号200001、200102。? 1.2.3 牛副伤寒活疫苗 疫苗的生产及检验按部颁《牛副伤寒活疫苗的制造及检验规程》进行,由甘肃省畜牧兽医研究所中试生产,批号200001、200102。? 1.2.4 饲养管理及免疫接种 两组试验牛分别免疫接种含硒型牛副伤寒活疫苗15 mg se 15亿活菌头,牛副伤寒活疫苗15亿活菌头,经颈部肌肉注射;两组试验牛均为统一放牧饲养、自由采食和饮水。? 1.2.5 采血与样品的测定分别在免疫接种前、接种后24 h、30天、60天、180天经颈静脉采血,并用2,3二氨基萘荧光法测定血硒含量。? 2 结果 ? 2.1 含亚硒酸钡注射液的安全剂量 对4月龄以下牦牛每头颈部或臀部肌肉注射5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、30 mg、60 mg均无1头死亡,因此是安全的,对成年牦牛也是安全的。? 2.2 血硒含量的变化 见表1。经方差分析,两组间差异显著(0.01<p<0.05)。 表1 免疫接种前后血硒含量(μg/ml)(略) 2.3 牛副伤寒的效价测定 结果见表2。经方差分析,两组间差异显著(p<0.05)。 3 讨论与分析 ? 3.1 从本试验结果看,亚硒酸钡注射液中毒量与含硒型牛副伤寒苗中亚硒酸钡中毒量是不同的。含硒型牛副伤寒苗的中毒量小于亚硒酸钡注射液的中毒量,可能由于细菌对动物机体产生的特异性反应加剧了亚硒酸钡的毒性;同时发现菌数的高低与硒的剂量呈反比例关系,只有在二者比例适宜的情况下方可起到“一针两效”的结果。 表2 免疫后不同时期血清牛副伤寒抗体滴度(略) 注:本试验的测定方法仍采用试管凝集法;抗原和阳性血清均由本课题组自制 3.2 含硒型牛副伤寒活疫苗在牛体内血硒浓度,随着时间的延长,血硒浓度逐渐呈下降趋势。经方差分析,试验组的血硒浓度显著高于对照组(p<0.05)。这种补硒方法,特别在牧区不失是一种较好的方法。但应注意,在免疫注射时剂量要准确,要充分摇匀稀释的疫苗,以免因剂量不准或未摇匀而引起的硒中毒;同时要注意疫苗的保存方法,以免由于疫苗保存不当,造成死菌率过高,引起牛体过敏样反应。? 3.3 由表2可见,含硒型牛副伤寒苗试验组血清抗体效价及上升速度与牛副伤寒苗对照组相比极显著地提高,从而证明在牛副伤寒苗中添加硒能提高机体的体液免疫功能,增强该疫苗的免疫效果。这一结果与肖西海等报道的结果一致。肖西海等人用牛副伤寒苗免疫剂量的一半免疫牦牛,同时或免疫前补硒,结果补硒+牛副伤寒苗组比单纯的补硒组和牛副伤寒苗组牦牛的存活率分别提高了1.75和14.39个百分点,死亡率分别降低了1.75和14.39个百分点。我们在测定血清中抗体效价中发现在免疫接种后,抗体效价的动态走势与对照组牛副伤寒苗相一致。? 3.4 我们在试验中发现,应用含硒型牛副伤寒活疫苗免疫的牦牛,明显地比应用单纯地牛副伤寒活疫苗的牦牛精神状况和营养状况好。关于硒能增加机体的体重有很多报道,由于条件、饲养管理等方面限制,未能开展这一方面的详细工作,有待进一步研究证实。? 3.5 在其他试验中,已证实用8亿活菌的含硒型牛副伤寒活疫苗能有效地预防牛副伤寒,这一点上同肖西海等人的研究。但考虑到生产中实际情况,仍将15亿活菌剂量作为预防牛副伤寒的实际免疫剂量。

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